對于實驗質量管理來說的*要素是，選擇和執行適當的質量控制（internal quality control,IQC）程序，例如根據測定項目的質量要求和方法特點選擇統計學標準、控制規則和質控品的數目，并嚴格執行IQC程序以提高IQC的質量。室內質控方法很多，但酶聯免疫吸附測定（ELISA）中仍主要采用Levey-Jennings質控圖。筆者長期從事免疫學檢驗質量管理工作。發現醫院、血站檢驗科在實際工作中存在一些比較普遍的問題或疑問。根據自身實踐經驗，結合相關專著，簡要介紹如下，供實驗室參考。

1.質控品準準備

1.1 質控品濃度 以需要質控的點設值進行質控，般在Cut-of值（即CO值，是由試劑盒提供的公式計算出的陰、陽性判斷標準）附近選點。建議選點方法。選擇S/CO值減去精密度測定中得到的3倍批間CV與S/CO值的乘積（意即3倍s）仍大于1的質控血清作為判斷實驗室重復性的室內質控點。

1.2 購買質控品建議用戶購買質控品進行室內質量控制，這樣的質控品的穩定性更有保證。上海信帆生物長期生物試劑和供應各類質控品，：joannw.com,:

1.3 自制質控品的制備方法 （1）收集陽性血清（無明顯溶血、黃疽、脂血或污染血清），累積到一定數量（夠本室使用6月以上）；（2）混勻，經56℃ lO小時滅活，（3）離心或過濾，去除纖維沉淀物（4）用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋．使S/CO值達到2～4之間（5）與定值參考品進行對比，求測定值（6）將質控血清按0.2～O.5毫升/支分裝、封口、貼簽，置-2O℃保存。

2.如何正確應用“即刻法”進行質控不能隨意使用“即刻法”，以下情況下可使用：（1）實驗室不是每天進行ELISA項目的檢驗，而ELISA試劑盒效期短．用一批號試劑盒連續常規檢測2O次以獲得RCV數據難度較大。采用“即刻法”質控統計方法，只需連續測3次，即可對第3次檢驗結果進行質控；（2）在某一檢測項目開始準備開展Levey-Jennings室內質控，尚未完成RCV測定時使用，其目的是盡早啟動室內質控，在開展lI缶床實驗的同時進行RCV測定，以便在獲取足夠數據后轉入Levey-Jennings室內質控。由于數據量小，質控規則單一，“即刻法”質控方法可靠性相對較差。在使用該質控方法時，務必加強實驗全程監控以保證質量，并在獲取足夠數據后及時轉入Levey-Jennings室內質控。實驗室需要更換質控品批號時，應提前開始下一批號質控品RCV靶值和標準差的測定，盡量避免使用“即刻法”質控方法。

3.質控規則的選擇

一般以x靶±2s為警告限，以x靶士3s為失控限（這是*的判斷實驗結果是否失控的原則），獲得“常規實驗室質量控制圖”空圖。每次（或每天）隨患者樣本測定的質控物值，標記在質控圖上。分析質控圖中每天檢測質控標本的結果分布，判斷當天檢測的結果數值是否在控制限之內。各實驗室選擇失控*，應根據本室條件進行選定。失控限定得太寬，幾乎不必擔心有失控可能，這樣常將失控結果誤判為合格，使質控失去意義；相反，失控限定得太嚴，使太多的結果甚至合格的結果判為失控，這也使質控失去意義。依據本室條件，設定失控限，是室內質控重要的環節。Westgard多規則質控分析法：在質控圖中，單純依據質控點超出2s為警告，超出3s為失控，在研究檢驗中已顯不夠。Westgard將常用的判斷失控的規則總結出許多條規則，選擇質控規則時必須兼顧室內質控對失控的檢出能力及誤判失控的可能性。在免疫學檢驗質控中，建議實驗室選擇使用以下

幾種質控規則：（1）13s:1個質控點落在士3s之外；（2）R4s：連續2個質控點相差超出4s范圍；（3）41s:連續4個質控點落在同一側士1s之外；（4）7x靶：連續7個質控點落在均值之一側；（5）7t：連續7個質控點呈連續上升或下降，或周期性波動變化。質控規則還有很多，各實驗室可依據自己的實際情況選擇質控規則。

4．更換試劑批號的處理方式

由于Elisa試劑盒的效期相對較短，而在冷凍條件下，免疫質控血清效期相對較長，一個批號的質控血清往往要幾個批號的試劑才會用完，因此實驗中常會遇到更換試劑批號后如何處理質控圖的問題。更換不同廠家的試劑必須重新計算RCV（在更換前完成RCV的測定，以免中斷室內質控）。更換相同廠家不同批號的試劑，使用質控血清濃度值上下相鄰的系列質控血清驗證新批號試劑S/CO值的一致性。推薦對不同批號試劑間系列血清結果回歸方程進行比較，以獲得兩批試劑間的換算因子，可以在同一質控圖上繼續描點。當換算因子為1時，使用實測S/CO值作圖。從理論上說，兩個回歸方程經統計學檢驗差異無統計學意義時，可以延續使用上批號質控圖。

5.分批質控方法

進行大批量標本的檢測時存在批內變異與批間變異的問題。有的實驗室每天需測試數百人的血清樣品，使用數塊甚至數十塊微孔板這就存在同一天檢測數塊板之間的變異（批內變異）和不同天檢測之間的變異（批間變異）的問題。推薦進行免疫實驗室室內質控的批內、批間室內質量控制具體方法如下（以1 ncu/ml抗-HIV舉例）。

5.1 每天進行多個酶標板檢測，每板均進行室內質控標本測定，計算室內質控標本的S/CO值，見表1。計算上表各板質控數據均數的均值和標準差時需遵循RCV的計算原則。2o d均值的均數和標準差，即為批間變異的靶值和標準差（），以控制天間變異，也稱批間變異,以2O天的標準差的均值作為批內標準差，以20天均值的均值作為批內靶值（），以控制天內不同檢測批之間的變異，也稱批內變異。

5.2 批內和批問Levey-Jennings質控圖的繪圖方法批內Levey-Jennings質控圖用每個酶標板質控S/CO值描點，以觀察和控制各板之問的變異。批內Levey-Jennings質控圖描點描在一張質控圖上（注意區分，作好相應記錄），便于觀察質控結果的集中趨勢和離散程度，也可以按完成檢測批的先后順序描在數張質控圖上，每天按相應批對應作圖。批間Levey-Jennings質控圖用發出報告時已經完成的各個酶標板質控S/CO值的均值描點，以控制日間變異。批間Levey-Jennings質控圖繪圖方法可能有不確定的時候，如完成*批或第二批時，可能不知道是否還有第三批甚至第四批（對于醫院系統尤其可能發生，因為當天標本數量不能確定，而先完成的報告不可能等所有標本完成檢測后才發出），筆者建議可以以當前已有質控S/CO值的均值描點，作為當前批間Levey-Jennings質控圖，以判斷已完成檢測結果的質控狀態；當有新的質控數據產生后，與前述質控數據（如有失控，則應剔除失控的質控S/CO值）,計算S/CO值均值并描點，作為新的批閱Levey-Jennings質控圖，以判斷新完成檢測結果的質控狀態。批間Levey-Jennings質控圖描點與批問Levey-Jennings質控圖描點一樣，既可以集中在一張質控圖上作圖，也可以按完成檢測批的先后順序分開作圖。

以上過程仍可以使用 即刻法”質控方法，批內“即刻法”質控以每天各檢測批（第3批起）的質控S/CO值進行,批間“即刻法”質控以每天（第3天起）的質控S/CO值均值進行要特別注意的是，如果在批內和批間Levey-Jennings質控圖中使用Westgard多規則，由于每天可能有數個質控點，在選擇規則時，不是越多越好，而應重點觀察質控結果的集中趨勢和離散程度。

6.復檢的重要性

實驗室應對有疑問的結果進行復檢。下面以乙型肝炎標志物為例介紹復檢標準及復檢結果的判斷方法。

6.1 復檢標準 復檢主要是針對有疑問或少見模式的檢測結果進行重新實驗。（1）對弱陽性結果進行復檢：建議對如下弱陽性結果進行復檢：HBsAg 1≤S/CO<10l抗HBs 1≤S/CO<2；HBeAg 1≤S/CO<2；抗-HBe 0.3≤ S/CO<1l抗一HBe 0.3≤S/CO<1。（2）對少見模式結果進行復檢：建議對少見模式結果進行復檢見表2。

6.2 對復檢結果的判斷及報告對復查結果的判斷應結合比色結果和組合模式進行。初、復檢結果一致，報告初檢結果；初、復檢結果不一致，但均接近CO值，可結合其他指標報告結果，或再次復檢，以兩次一致結果報告；對體檢標本，單獨的抗-HBe（或兼抗-HBs）或抗-HBc（或兼抗-HBs）陽性，且接近S/CO值，復檢結果為陰性，可報告陰性。已經復檢的結果應在報告中加以注明，如“結果已經復查”或“兩次結果一致”等。對特殊模式結果提出建議，如“建議重新抽血復查”或“建議跟蹤復查”等。

7.質控分析的基本原則

7.1 實事求是的原則 室內質量控制分析的處理方法必須實事求是，充分認識實驗過程中可能影響到檢驗結果可靠性的各種問題，逐一進行分析、糾正。

7.2 不與實驗原理和試劑盒使用說明相抵觸的原則對質量控制結果的分析和處理必須符合試劑盒的設計原理，并不得與試劑盒使用說明書相抵觸，沒有根據的分析和處理過程是不被認可的。

7.3 不與研究檢驗操作規程和質量管理體系相抵觸的原則整個分析處理過程務必科學、全面，不與研究檢驗操作規程和質量管理體系相抵觸，要足以為相關舉證工作提供依據。

7.4 復檢確認的原則幾種可能的失控，如假失控，無需立即重新檢測患者標本的失控，或者需要立即重新檢測患者標本的失控，原則上都必須對質控品進行復檢以驗證失控原因分析和處理是否正確，以及失控原因是否得以糾正。只有極少數情況，如設置CO公式錯誤，或選擇比色波長不正確，又未超過比色時間，可糾正錯誤后重新比色，不必復檢確認Leve-Jennings質控是zui重要的量化室內質控，嚴謹而客觀地實施，動態地分析質控結果十分重要。同時，Levey-Jennings質控有其自身的局限性，它不是判斷實驗結果是否可靠的*標準，實驗室每一個環節都與檢驗質量密切相關，實驗室工作人員只有認真對待，耐心細致地做好各方面的工作，才是檢驗質量可靠性的根本保證。