PRODUCT CLASSIFICATION
產品分類HE染色實驗的檢測方法
HE染色法,即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質分別稱為嗜堿性和嗜酸性;若于兩種染料的親和力都不強,則呈中性。一般的組織變化和組織產物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態(tài)學常用的染色方法。
染色結果:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。
1 材料
1.1 主要試劑
石蠟、無水乙醇、氨水、硫酸鋁鉀、碘酸鈉、冰醋酸、甘油、蘇木素、伊紅
1.2 溶液配制
PBS溶液:600ml的ddH2O中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g
KH2PO4,用HCl調節(jié)溶液pH至7.4,定容至1L,濾器過濾后,高壓滅菌,室溫保存。
1.3 主要儀器及耗材
正置顯微鏡、恒溫烘箱、石蠟切片機 、攤片機、移液器、水浴鍋
數(shù)字切片掃描儀:濱松 NanoZoomer( S210)公司產品
2 方法
2.1樣本包埋與固定
(1)固定:根據(jù)需要取材后置于福爾馬林中固定48小時后;
(2)洗滌與脫水:將固定后的組織用流水沖洗,去除殘留的固定液和雜質。不同濃度的乙醇逐級脫水,50%、70%、85%、95%直至純酒精(無水乙醇),每級2小時。70%乙醇中可長期保存;
(3)透明:50%酒精+50%二甲苯中2小時,純二甲苯兩小時,再一次純二甲苯兩小時;
(4)浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1~2小時,再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬各3小時左右;
(5)包埋:將浸好蠟的組織塊放入裝有蠟液的容器中,擺好組織塊位置。待石蠟凝固后將周圍多余的石蠟去除,準備切片;
(6)切片:將切片刀裝在刀片機的刀架上并固定緊,固定蠟塊底座或蠟塊,調整蠟塊與刀至合適位置,刀刃與蠟塊表面呈5度角。調整切片機上的切片厚度為4-7μm,然后切片。
2.2 HE染色
(1) 脫蠟:60℃、30min;二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ;
(2)水化:將脫蠟后的切片經100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min ;
(3)將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘,流水沖洗;
(4)1%鹽酸酒精分化0.5-1min;
(5)流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻;
(6)碳酸飽和水溶液反藍1min后流水沖洗;
(7)入70%和90%酒精中脫水各10min;
(8)入酒精伊紅染色液染色2-3min;。
(9)脫水透明:染色后的切片經純酒精脫水,再經二甲苯使切片透明;
(10)封片:將已透明的切片滴上中性樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標箋,切片標本就可使用;
2.3 圖像采集
通過掃描,采集圖片。
送樣運輸要求:
樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運輸送樣。
切勿固定時間過長,切勿冷凍結冰。
HE染色實驗的檢測方法
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